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羊驼GFP-beads 纳米抗体beads【限时特价499元!】IP 免疫沉淀 纳米抗体偶联beads




货号:KTSM1301

规格:500ul/管 (50% nanobody coated Agarose suspension)

交货周期:现货

运杂费: 登录后可查看运杂费

DeepBio得分:5567.2
DeepBio得分 是基于文献引用次数,影响因子,文献新近度等因素计算的客观产品评级,得分越高表明该产品经过越可靠的实验验证,质量可信度越高

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产品说明书


产品说明书 【KTSM1301】anti-GFP(A) for Immunoprecipitation

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* 羊驼GFP-beads(绿色荧光蛋白)广泛应用于蛋白定位和蛋白动力学分析。

* 康体生命GFP-beads特价只要499!全国免费运输


anti-GFP(A) for Immunoprecipitation

货号:KTSM1301

规格:500 µl(20次,50% nanobody coated Agarose suspension)

保存条件:4℃(禁止冻存)

保质期:6个月

产品说明

绿色荧光蛋白广泛应用于蛋白定位和蛋白动力学分析。在质谱分析、酶活性测定等生化分析手段中,这些GFP融合蛋白及其互作因子可以通过anti-GFP(A)的作用快速高效的分开。anti-GFP(A)是一种共价偶联羊驼单分子纳米抗体的琼脂糖珠。适用于组织和细胞中GFP融合蛋白的免疫共沉淀实验。


产品属性

珠子尺寸:~40 µm(7.5%交联琼脂糖珠)

储存溶液:20%乙醇

结合能力:10 µl anti-GFP(A) 结合 3-4 µg GFP


推荐使用溶液


Buffer

Composition

Lysis buffer(CoIP)

10mM Tris-HCl pH 7.5;150mM NaCl;0.5mM EDTA;0.5% NP-40

RIPA buffer

10mM Tris-HCl pH 7.5;150mM NaCl;0.5mM EDTA;0.1% SDS;1% Triton X-100;1% Deoxycholate

Dilution/Wash buffer

10mM Tris-HCl pH 7.5;150mM NaCl;0.5mM EDTA

2×SDS loading buffer

120mM Tris-HCl pH 6.8; 20% glycerol; 4% SDS, 0.04% bromophenol blue; 10%β-mercaptoehanol


操作说明

1.  收集细胞 :

对于一个免疫共沉淀反应,推荐使用106-107个表达GFP融合蛋白的哺乳动物细胞。吸出培养液,加1ml预冷PBS于细胞中并刮下细胞,之后将细胞转入预冷管中。4℃,500g离心3分钟,弃上清。用预冷PBS洗两遍细胞沉淀物,轻轻重悬细胞。

2. 裂解细胞:

(1) 用200µl预冷的Lysis buffer重悬细胞。

注:在Lysis buffer中加入蛋白酶抑制剂和1mM PMSF。

对于核蛋白可选做:使用加入1mg/ml DNase、2.5mM MgCl2、蛋白酶抑制剂RIPA buffer和1mM PMSF。

(2) 将离心管放在冰上30分钟,每10分钟重悬一次细胞。

(3) 16000g,4℃离心10分钟,将上清转移到一个新的预冷离心管中,加300µl dilution buffer,丢掉沉淀。

注:在这步细胞溶解物可放入-80℃长期保存。

可选做:在稀释液中加1mMPMSF和蛋白酶抑制物。

3. 平衡beads :涡旋anti-GFP(A),吸取25µl anti-GFP(A)至预冷500µl dilution buffer中,1200g,4℃离心2分钟,去掉上清,重复两次。

4. 结合蛋白:

(1) 将第3步获得的细胞蛋白提取液加入平衡后的anti-GFP(A)中,如有需要,可取50µl上清液用于免疫印迹分析。在4℃环境中上下颠倒孵育1小时。

(2) 1200g,4℃离心2分钟,去掉上清。

5. 洗anti-GFP(A):重悬GFP beads于500µl预冷的溶解液中,1200g,4℃离心2分钟,去掉上清,重复两次。

可选做:在第二次清洗中将盐浓度提高到500mM。

6. 洗脱结合蛋白:

(1) 100µl SDS loading buffer重悬anti-GFP(A)。

(2) 将anti-GFP(A)在95℃中加热10分钟,使免疫复合物分离出来。1200g,4℃离心2分钟,取上清跑SDS-PAGE。

(3) 可替代步骤(1)和(2):加50 µl 0.2M,PH2.5 的甘氨酸重悬anti-GFP(A),保持混匀状态孵育30s,1200g,4℃离心2分钟。将上清转移至新的离心管中,加入5 µl 1M PH10.4的Tris base中和甘氨酸。可重复此步骤以增加洗脱效率。


实验结果

1. 细胞中GFP蛋白的免疫沉淀实验结果:


2. 组织中GFP融合蛋白的免疫沉淀实验结果:



声明:本产品仅供科学研究使用,不能用于人、动物的医疗或诊断程序,不能使用本产品作为食品、化妆品或家庭用品等。

下载说明书

【KTSM1301】anti-GFP(A) for Immunoprecipitation


康体生命简介
康体生命科研队伍
康体生命成立于2016年,是国内第一家专注于纳米抗体研发、销售,提供全方位抗体应用解决方案的国家级高新技术企业。康体生命的研发队伍推崇创新精神,严格把控产品质量,攻坚克难,孜孜不倦地在纳米抗体领域深耕。康体生命致力于打破国外抗体技术垄断,成就纳米抗体民族品牌。
全球领先的科研创新能力与成熟、雄厚的纳米抗体研发实力:
康体生命已在全球科研、组织病理、体外诊断、药物研发、食品安全等多个领域为客户提供高品质的抗体原料、抗体产品和定制服务。
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