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Cell Counting Kit-8 CCK8试剂盒




货号:CK04-3

规格:1000 tests

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DeepBio得分:5567.2
DeepBio得分 是基于文献引用次数,影响因子,文献新近度等因素计算的客观产品评级,得分越高表明该产品经过越可靠的实验验证,质量可信度越高

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《原理图》
Ⅰ. 概述:Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 利用了Dojindo开发的水 溶性四唑盐 — WST®-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3- (4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐),它 在电子载体1-Methoxy PMS存在的情况下能够被还原 成水溶性的甲臜染料。 CCK-8溶液可以直接加入到细胞样品中;不需要预配 各种成分。CCK-8法是用于测定细胞增殖或毒性实验 中活细胞数目的一种高灵敏度,无放射性的比色检测 法。WST®-8被细胞内脱氢酶氧化还原后生成的橙黄 色甲臜染料能够溶解在组织培养基中,生成的甲臜量 与活细胞数量成正比。
 
Ⅱ . 操作步骤
Ⅲ. 注意事项
1. 首次实验时,建议参考文献上的实验条件或做预实验摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的显色时间。方法:取已知细胞数量的细胞悬液加入到培养板中,然后用培养基依次等比例稀释成一个系列浓度的细胞悬液,细胞培养一段时间后加CCK-8试剂,继续培养,过0.5-1 h,从培养箱中取出培养板观察颜色是否发生明显变化?如果没有,放入培养箱中继续培养,过1 h左右从培养箱中拿出观察颜色变化⋯⋯直到颜色发生明显梯度变化后,用酶标仪进行测定,并记录下反应时间。
2. 根据实验设计的天数,若是细胞增殖实验,一般选取O.D.值在0.2-1.0 (扣除空白后) 范围内的细胞数量;若是做药物对细胞的毒性实验,一般选取O.D.值在1.0-2.0 (扣除空白后) 范围内的细胞数量。但也存在有部分细胞的O.D.值达不到1.0的情况。
3. 接种时请充分混匀细胞悬液,保证每孔接种细胞数量接近一致。如果细胞容易聚团,建议每接种几个孔后,将细胞悬液重新混匀后再接种。
4. 培养时培养板边缘孔内的培养基易挥发,为了减少误差,建议培养板边缘孔只加培养基,而不作为指标检测孔。
5. 为了减少差异,请尽量采用多通道移液器。加入CCK-8时,建议45°斜贴培养板孔壁加样,切勿直接插入培养基液面下,否则容易产生气泡,影响检测结果。
6. CCK-8试剂加入时需快速,尽可能减少试剂在移液器上的残留所带来的误差,也可用培养基稀释CCK-8试剂1倍,混匀后每孔加入20 l,减小复孔间误差。
7. 加完CCK-8后,请轻微倾斜培养板使培养基覆盖培养板孔壁上残留的CCK-8,并轻轻拍打培养板使CCK-8和培养基混匀。如果培养基需要换液,可将CCK-8与培养基按照1:10的比例混匀后添加。
8. 试剂中所含的WST®-8会与还原剂反应,生成WST®-8甲臜从而影响实验结果。若实验中所采用的药物具有还原性,请在加入CCK-8前进行换液。
9. 若细胞培养时间较长,培养基颜色、pH值等条件易发生改变,此时加入CCK-8前需换液。
10. 如果样品为高浑浊度的细胞悬液,建议采用双波长进行测定,检测波长450-490 nm,600-650 nm作为参比波长。
11. 由于CCK-8几乎无细胞毒性,细胞可在实验后进行中性红法或结晶紫法等其他实验。
12. 如果要测定细胞的具体数量,建议先做标准曲线。