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线粒体提取试剂盒




货号:SM0020-50T

规格:50T

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线粒体提取试剂盒
英文名称 mitochondrial extraction kit
储存条件 四周内使用可4℃储存,长期保存请置于-20℃。
单位 
产品简介:
线粒体提取试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于动物软组织(肝或脑组织)和硬组织(肌肉)以及培养细胞的线粒体的制备。其制备物产量高,可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。
操作步骤:
1. 样本处理 a. 组织匀浆:称取100~200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等,PBS或生理盐水冲洗,洗净血水,滤纸吸干,用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer,0℃冰浴上下研磨组织20次; b. 培养细胞匀浆:消化细胞,PBS洗涤,800g离心5~10 min收集细胞,计数。每次提取需要5×107个细胞,加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞,将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内,0℃冰浴研磨30~40次。
2. 将组织或细胞匀浆物转移到离心管,4℃,1000g 离心5 min。
3. 取上清,转移至新的离心管中,4℃,1000g再次离心5 min。

4. 取上清,转移至新的离心管中,4℃, 12,000 g 离心10 min。离心后的上清含胞浆成分,可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管,线粒体沉淀在管底。
5. 往线粒体沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重悬线粒体沉淀,4℃,1000 g 离心5 min。
6. 取上清,转移至新的离心管中,4℃, 12,000 g 离心10 min。弃上清,高纯度的线粒体沉淀在管底。
7. 用50 -100μL Store Buffer 或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀,立即使用或-70℃保存。