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MoBio 强力土壤 DNA 提取试剂盒 PowerSoil® DNA Isolation Kit




货号:12888-100

规格:100T

交货周期:现货,订货就送保温杯。

运杂费: 登录后可查看运杂费

DeepBio得分:5567.2
DeepBio得分 是基于文献引用次数,影响因子,文献新近度等因素计算的客观产品评级,得分越高表明该产品经过越可靠的实验验证,质量可信度越高

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用于从所有土壤类型中分离微生物基因组DNA
  • 快速简便的方案可在30分钟内从多达250 mg的样品中分离出高质量的DNA
  • 抑制剂去除技术去除了艰难样品类型中的PCR抑制剂
  • 经过优化,可从困难甚至最困难的环境样品中分离DNA

使用DNeasy PowerSoil试剂盒从任何土壤或环境样品中分离DNA。DNeasy PowerSoil试剂盒可以使用抑制剂去除技术(IRT)从甚至坚硬的堆肥,沉淀物或粪便样品中分离出微生物基因组DNA。IRT消除了腐殖酸含量,留下了高纯度的DNA,可用于下游应用分析。PCR分析可以检测来自各种生物体的DNA,包括真菌,藻类,革兰氏(+/-)细菌(例如枯草芽孢杆菌,炭疽芽孢杆菌),放线菌(例如链霉菌)和线虫。

使用DNeasy PowerSoil试剂盒分离DNA可以在QIAcube Connect上自动进行

DNeasy PowerSoil试剂盒以前由MO BIO出售,称为PowerSoil DNA分离试剂盒。

从土壤、粪便等各种环境样品中提取出不含PCR抑制因子的高质量的微生物基因组DNA 产品特点 从土壤、粪便等复杂环境样品中提取不含抑制因子的高质量DNA 专利技术100%去除腐植酸等PCR抑制因子 只要30min就能快速提取250mg土壤样品DNA 描述 MO BIO的强力土壤DNA提取试剂盒(PowerSoil® DNA Isolation Kit)使用了专利的抑制因子去除技术(Inhibitor Removal Technology®),能提取所有类型土壤,以及包括粪便、肠内容物、生物固体等环境样品

简介
PowerSoil® DNA Isolation Kit包含了我们创新专利抑制因子去除技术®(IRT),用于提取所有类型环境样品高质
量 DNA。环境样品包括堆肥、底泥、粪肥等富含腐植酸的各种难提土样样品。提取出来的高质量 DNA 可直接进
行 PCR 扩增。PCR 扩增结果证明提取到了多种微生物,其中包括细菌(如枯草芽孢杆菌、炭疽杆菌)、真菌(如
酵母、霉菌)、藻类和放线菌(如链霉菌)。
操作预览
PowerSoil® DNA Isolation Kit比MOBIO自家的 UltraClean® Soil DNA Isolation Kit多了腐殖质/棕色物质去除过
程。该处理方法有效去除所有类型土壤中的PCR抑制因子。环境样品加入到Bead Beating tube 中快速充分均质化。
细胞在机械研磨和化学试剂共同作用下裂解。总基因组 DNA 吸附到离心柱硅胶滤膜上。DNA 经过冲洗后从滤膜
上洗脱下来。最终DNA可直接用于扩增等下游应用。
珠磨研磨
PowerSoil® DNA Isolation Kit 不需要使用高速度强力珠磨研磨设备。若目的微生物需要比涡旋仪还要强力的均
质器才能提取得到,此试剂盒也可以用在 PowerLyzer™ 珠磨研磨机上。MO BIO 现在专门提供了 PowerLyzer™
PowerSoil® DNA Isolation Kit(货号:12855-100),一款使用了适合强力珠磨研磨的研磨珠套管的土壤DNA 提取试
剂盒。
相关信息请浏览http://www.anbiosci.com/MBweibo/blog.htm文章:
http://www.anbiosci.com/MBweibo/Molecular_Biology_of_Soil_an_introduction.htm
http://www.anbiosci.com/MBweibo/DNA_Isolation_from_Soil_Part_I.htm
http://www.anbiosci.com/MBweibo/DNA_Isolation_from_Soil_Part_II+The_Chemistry.htm
ANBIOSCI TECH LTD
PowerLyzer™ 24 Bench Top Bead-Based Homogenizer
PowerLyzer™ 24 Bench Top Bead-Based Homogenizer大型珠磨研磨设备专门设计用于快速高效均质化所有类
型生物样品。再不到30 秒内同时处理24个2ml管。真正自动化处理,大幅减少样品处理时间。松针、种子、孢
子、真菌垫和粘土等坚硬复杂样品都能轻松高效裂解。
可选高通量提取
MO BIO提供了真空泵抽吸的操作说明,离心柱上DNA 的绑定吸附、冲洗步骤的离心操作由真空抽吸替代。
一次可同时处理20个样品。更高通量提取,可选择MO BIO的PowerSoil® -htp 96 Well Soil DNA Isolation Kit。使用
96孔板(13cm×8cm×5.5cm)离心机(2500g)和振荡器一次处理2×96个样。
设备要求
微型离心机(10000g)
移液器(50μl~500μl)
Vortex-Genie®2 涡旋仪(MO BIO货号#13111-V-220)
涡旋仪适配器(MO BIO货号 13000-V1-24)
保存
组分室温(15-30℃)保存。
试剂盒组分
货号:12888-50 货号:12888-100
组分 量 量
PowerBead Tubes (contain 750 μl solution) 50 100
PowerSoil®Solution C1 3.3ml 6.6ml
PowerSoil®Solution C2 14ml 28ml
PowerSoil®Solution C3 11ml 22ml
PowerSoil®Solution C4 72ml 144ml
PowerSoil®Solution C5 30ml 2×30ml
PowerSoil®Solution C6 6ml 12ml
PowerSoil®Spin Filters (units in 2 ml tubes) 50 100
PowerSoil 2 ml Collection Tubes 200 400
操作步骤
1、加入0.25g土壤样品到一个PowerBead Tubes中
这一步发生了什么:加入样品后,下一步就是研磨均质以及细胞裂解。PowerBead Tube中含有的缓冲液可(a)
有助散开土壤,(b)初步溶解腐植酸。
2、轻轻涡旋混匀
这一步发生了什么:混匀分散开各组分。
3、检测 Solution C1。若出现沉淀,60℃水浴至全溶解
这一步发生了什么:Solution C1含有 SDS以及其它用于细胞裂解的试剂。SDS 作为去垢剂,能破坏细胞膜上
的脂肪酸、脂质。温度过低时会产生沉淀。60℃孵育可重溶SDS,并可趁热使用。
4、加入 60μl Solution C1,上下颠倒数次混匀
5、把PowerBead Tubes固定在涡旋仪适配器上,最大转速(3200rpm,若涡旋仪达不到此速度,可适当延长5~10min)
涡旋连续振荡10min(使用24头适配器同时处理12个样品,涡旋时间延长5-10min)。
注意:涡旋振荡步骤对于研磨均质和细胞裂解至关重要。步骤1~4 的化学试剂作用,这一步引入机械作用。外
形不规则而锋利的研磨珠随机碰撞,充分打开细胞膜释放细胞内容物。
这一步发生了什么:微生物细胞在化学(裂解缓冲液)和机械(涡旋振荡)力共同作用下崩解。许多类型微
生物细胞只有在这种化学加珠磨研磨作用力下才会裂解。使用涡旋仪适配器可提供相同的力矩和角度最大化
研磨效果。避免使用胶带固定,以免震动过程中松脱影响研磨效果。
6、室温 10000g离心30s
7、转移上清至一个干净的2ml Collection Tube(试剂盒提供)中
注意:大约可获得 400-500μl 上清液。回收到的上清体积取决于土样的吸水性且不影响处理效果。上清可能
颜色较深并含有少量土样,下面步骤可解决这两个问题。
8、加入250μl Solution C2到上清中,涡旋混匀5s。4℃孵育5min
这一步发生了什么:Solution C2是 IRT(抑制因子去除技术)重要组成之一。含有组分可沉淀那些会影响DNA
纯度和下游实验的非DNA的有机、无机物质,如腐植酸、细胞碎片、蛋白质等。
9、室温10000g离心1min
10、避开沉淀小珠,转移上清≤600μl到一个新的收集管中
这一步发生了什么:沉淀物含有细胞碎片、土壤、研磨珠以及腐植酸等。为了更高的DNA 得率和纯度,尽量
避免吸到沉淀物。
11、加入200μl Solution C3到上清中,涡旋混匀。4℃孵育 5min
这一步发生了什么:Solution C3是另一个IRT(抑制因子去除技术)重要组成。含有组分可进一步沉淀那些
会影响 DNA纯度和下游实验的非DNA的有机、无机物质,如腐植酸、细胞碎片、蛋白质等。
12、室温10000g离心1min
13、避开沉淀小珠,转移上清≤750μl到一个新的收集管中
这一步发生了什么:沉淀物含有细胞碎片、土壤、研磨珠以及腐植酸等。为了更高的 DNA 得率和纯度,尽
量避免吸到沉淀物。
14、Solution C4使用前先摇匀。加入 1200μl Solution C4 到上清中,涡旋混匀5s
这一步发生了什么:Solution C4是一个高浓度盐溶液。此步为了调整DNA溶液的盐浓度。DNA在高盐环境
下可牢牢地吸附在硅胶滤膜上,大部分其它非DNA的有机无机成分不会吸附。但仍然会少量残留。
15、加载约675μl 上清到Spin Filter中,室温 10000g离心1min。弃去滤液,继续加载675μl上清,室温10000g
离心 1min。重复直至过滤完所有上清。
注意:每个样品共需加载3次。
这一步发生了什么:DNA在高盐环境下选择性地吸附到硅胶滤膜上。
16、加入500μl Solution C5到Spin Filter中,室温10000g离心30s
这一步发生了什么:含有酒精的冲洗缓冲液 SolutionC5,可进一步去除滤膜上非 DNA 成分的盐份、腐植酸
等杂质。
17、弃去上清
这一步发生了什么:滤液不含DNA.
18、室温10000g离心 1min
这一步发生了什么:进一步去除残留Solution C5(酒精冲洗液)。为避免残留的酒精成分影响PCR、酶切、
胶回收等下游实验,必须充分去除Solution C5(可吹干)。
19、小心转移Spin filter到2ml Collection Tube(试剂盒提供)中,尽量避免Solution C5污染
注意:极力避免酒精冲洗液污染。
20、加入100μl Solution C6到白色滤膜中心
注意:Solution C6要加到滤膜中心,并保证整个薄膜能充分润湿。可选:无菌DNA-Free PCR Grade water 货
号#17000-10 也可适用于DNA 洗脱。若担心DNA降解,可使用无菌TE 缓冲液代替C6 进行洗脱。
21、室温10000g离心30s
22、弃去Spin Filter。此时收集管中的DNA 可直接用于下游实验,无需进一步纯化
建议DNA 冷冻保存(-20℃~-80℃)。C6溶液不含EDTA。
感谢选用PowerSoil® DNA Isolation kit!
若使用 PowerVac™ Manifold抽吸代替离心
每个样品使用一个Spin Filter离心管。保持Spin Filter安放在2ml Collection Tube中知道需要真空抽吸滤过。
记号笔标记标注好Collection Tube顶部及Spin Filter。若 Spin Filter在过滤过程中堵塞,仍可以改为常规离心继续
继续提取DNA。
此操作说明书第四步需要外自备 100%乙醇。
1、每一个样品需要安装一个铝质PowerVac™ Mini Spin Filter Adapter(MO BIO 货号:11992-10或11992-20)到
manifold 的鲁尔接口上。轻轻用力安紧Spin Filter。关闭manifold 其它所有不用的接口。
注意:铝质PowerVac™ Mini Spin Filter Adapters 可重复使用。
2、加载650μl样品裂解物(接上文步骤14)到Spin Filter。
3、打开真空泵,打开使用的端口的阀门。打开阀门是扶稳Spin Filter,保持直立。等待裂解物全部通过滤膜,再
加650μl裂解物。继续抽吸滤过。关闭阀门。
注意:可关闭已抽滤的端口,以提高其它端口压力,加快抽滤速度。
4、加入800μl 100%乙醇到Spin Filter。扶稳Spin Filter,打开阀门抽滤。抽滤完成后关闭阀门。
5、每个Spin Filter加入 500μl C5 溶液。打开阀门抽滤。当所有C5 滤完后,继续抽滤1 min,抽干滤膜。关闭所
有端口。
6、关闭真空泵。打开一个未使用的端口释放manifold 的压力。若20个端口都在使用,断开真空泵连接。进入下
一步操作前确保真空压力已释放。必须先关闭真空泵,防止滤液倒流。
7、拿下Spin Filter,放回到原来标记的相应2ml Collection Tube中。10000g离心1 min 以充分干燥滤膜。
8、把Spin Filter转移到一个新的2ml Collection Tube(试剂盒提供)中,加入100μl C6到白色滤膜中心。可选:
可适用无菌DNA-Free Water洗脱DNA(货号:17000-10)。
9、室温 10000g离心30s。
10、弃去Spin Filter。此时滤液中的DNA 可直接用于下游实验,无需进一步处理。
疑点难点
加样量
此试剂盒的设计加样量是0.25g。不同土样类型加样量请参照下表:
土样类型 建议最大加样量(g)
干沙土 Dry sandy soil 0.5
干粘土 Dry clay 0.25
陶土 Potting Soil 0.1
底泥 Sediment 0.25
壤土 Loam 0.25
泥炭土 Peat moss 0.1
肥沃农田土壤 Rich farm soil 0.25
改良土 Amended soil 0.15
堆肥 Compost samples 0.1
* 5g以上土壤DNA大量提取,建议用PowerMax Soil(货号:12988-10)
湿土:
若土样含水量较高,可先行室温10000g离心30s,尽量去除上清。然后转入PowerBead Tube进入下一步处理。
DNA扩增失败
 请同时使用电泳凝胶法和分光光度法检测DNA 得率。模板DNA 浓度太高会抑制PCR扩增。
 通常用 PowerSoil DNA提取的DNA 无需稀释模板DNA,若扩增失败,可尝试总DNA。
 若经过上述努力PCR扩增仍失败,请优化PCR反应条件、引物选择。
最终 DNA呈棕色:
我们从未遇到使用PowerSoil的最终DNA呈棕色。若遇到此情况,请与我们联系。
可选裂解方法(真菌、孢子样品 DNA提取):
 加入C1溶液后,涡旋3~4s混匀,70℃孵育5min。涡旋3~3s,70℃再孵育5min。涡旋3~4s。此可选步骤能
减少DNA被剪切程度同时也会一定程度上降低得率。
 若细胞非常难裂解,可加入C1 溶液后70℃孵育10min,然后进行第五步继续操作。
DNA浓缩
最终 DNA体积为100μl。要浓缩DNA 可加入4μl 5M NaCl,上下颠倒3-5 次混匀。然后加入200μl 100%冷
乙醇,上下颠倒 3-5 次混匀。室温 10000g 离心 5s。弃去所有上清。用真空离心蒸发器、干燥器或冷干机除去残
余乙醇。用去离子水或灭菌10mM Tirs重悬DNA。
DNA保存
洗脱到C6 溶液(10mM Tris)的DNA必须保存在-20℃~-80℃防止降解。为了延长保存时间,建议把DNA 等
分后-80℃保存。你也可以用TE缓冲液洗脱DNA,而 EDTA会抑制下游PCR等酶反应,不建议采用。
湿粘土 Wet clay 0.25